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        淋球菌核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)

        本試劑盒適用于定性檢測男性尿道、女性宮頸分泌物拭子中淋球菌核酸。

        • 產品品牌: REAGEN
        • 產品貨號: RN095FP
        • 產品規格: 50/100T
        • 產品適用: 本試劑盒適用于定性檢測男性尿道、女性宮頸分泌物拭子中淋球菌核酸。
        • 產地來源: 深圳
        • 保質期: 12個月

        【產品名稱】

        通用名稱:淋球菌核酸檢測試劑盒(熒光PCR)

        【包裝規格】

        96人份/

        【預期用途】

        本試劑盒適用于定性檢測男性尿道、女性宮頸分泌物拭子中淋球菌核酸。

        【檢驗原理】

        本試劑盒采用聚合酶鏈式反應(PCR)結合Taqman技術,對淋球菌(Neisseria gonorrhoeae)的特異性DNA核酸片段進行熒光PCR檢測。

        【主要成分】

         

        組分成分

        96人份/

        主要成分

        規格

        數量

         

         

        PCR反應液

         

         

        1950μL /

        1

        引物、探針、脫氧核糖核苷三磷酸(dNTP)、緩沖體系

         

        酶混合液

        50μL /

        1

        Taq酶、UDG

        陽性對照

        200μL /

        1

        含目的片段的質粒

        陰性對照

        500μL /

        1

        生理鹽水

         

        【儲存條件及有效期】

        試劑置于-30~-15避光保存,有效期為12個月。本產品反復凍融應不超過5。

        【適用儀器】

        熒光定量PCR儀:ABI 7500熒光PCR.;ABI Quantstudio5 ;Gentier 96R;SLAN-96P全自動醫用PCR分析系統。

        【樣本要求】

        1.適用樣本類型:男性尿道、女性宮頸分泌物拭子

        2.樣本保存與運送:

        上述采集的樣本可立即用于檢測,或2-8℃保存(不超過24小時),長期保存請置于-20℃。標本運送用冰壺加冰或泡沫箱加冰密封進行運輸。

         

         【檢驗方法】

        1. 樣本處理

        取待測樣本200ul,按照核酸提取試劑盒說明書進行核酸提取。

        2. 試劑配置(在準備區進行,與擴增區分開,冰上操作

        注:試劑使用前要完全解凍,使用前渦旋混勻,10000 rpm離心5 s,確保試劑完全離心至管底,否則會出現裝量差異的現象。

        若有N個待檢測樣本,則需配置N+2擴增反應(待檢樣本數N+1個陽性質控品+1個陰性質控品,按下表要求進行擴增反應液的配制,配制完成后充分震蕩混勻,10000 rpm離心5 s。按每管20 μl分裝至0.2 ml PCR管中,并做好標記,擴增反應液需現配現用。


        N人份(μL)

        PCR反應液

        N+2×19.5

        酶混合液

        N+2×0.5

        總量

        N+2×20

        3. 加樣在樣品處理區進行,冰上操作。

        按陰性質控品、待測樣品、陽性質控品的加樣順序,分別取5μL,加入至已分裝擴增反應液的八聯管中,反應總體系為25μL。蓋緊管蓋,短暫離心后置于熒光定量PCR儀中,并記錄樣本擺放順序。

        4. 擴增反應(在擴增區進行

        選擇FAM通道檢測淋球菌核酸,選擇CY5通道檢測內標。按以下擴增程序表設置PCR擴增參數。

        步驟

        溫度

        時間

        循環數

        1

        預變性

        95

        3min

        1

        3

        變性

        95

        10sec

        45cycle

        4

        退火延伸及熒光檢測

        60

        30 sec

        報告熒光:FAM、CY5;淬滅熒光:NONE。

         5.質量控制


        FAM通道Ct

        CY5通道Ct值(內部質控品)

        陰性對照

        UNDET

        陽性對照

        35

        35

        以上要求需在同一次實驗中同時滿足,否則,本次實驗無效,需重新進行

        6.結果判讀

        反應結束自動保存結果,根據分析后圖像調節Baseline Start 值、End 值以及Threshold 值(可以根據實際情況自行調整,Start 值可以在3~15、End 值可設在5~20,調整陰性對照的擴增曲線平直或低于閾值線),點擊Analysis 自動獲得分析結果,在Report 界面觀看結果。

        試驗結果判斷


        FAM通道

        CY5通道

        結果判定

        1

        Ct值>40

        Ct值<35

        陰性

        2

        Ct值≤40

        有或無擴增曲線

        陽性

        3

        Ct值>40

        Ct值>35

        復檢:重新取樣檢測

         

        檢驗結果的解釋

        1.實驗室環境污染,試劑污染,樣品交叉污染會出現假陽性結果,如陰性對照檢測為陽性,則需做進一步實驗來確認是哪類污染。如為試劑污染,需開封新的試劑盒再次進行實驗;如為樣品交叉污染,應重復實驗;如為實驗室環境污染,需對實驗室進行徹底清潔或更換實驗室再進行實驗。

        2.試劑運輸、保存或配制不當會引起試劑檢測性能下降,出現假陰性結果。如陽性對照檢測為陰性,應開封新的試劑盒再進行實驗。

        檢測方法的局限性

        1. 該試劑盒僅為定性產品,不做定量測定。

        2. 該試劑盒的檢測結果僅供臨床參考,對患者的臨床診治應結合其癥狀或體征、病史、其它實驗室檢查及治療反應等情況綜合考慮。

        3. 當樣本的細菌含量低于最低檢出限時,可能會出現假陰性。陰性結果僅說明提取的核酸濃度低于該試劑盒的檢測極限,但不能完全排除細菌感染的可能。

        【產品性能指標】

        1.準確性:企業陽性參考品檢測結果全部為陽性,陽性率為15/15。

        2.最低檢測限:該試劑盒最低檢測限為500copies/mL。

         

        注意事項

        1.請嚴格按照操作步驟操作,試劑配制和加樣等步驟請嚴格按照說明書要求在冰上操作。

        2試劑配制建議在試劑配制區進行,樣品處理要求生物安全柜內操作。臨床實驗室應嚴格按照《醫療機構臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法》等有關分子生物學實驗室、臨床基因擴增實驗室的管理規范執行。

        3.反應液中的成分對光敏感,應避光保存。反復凍融可能降低試劑盒靈敏度,請按檢測頻次將反應液以適當體積分管保存。

        4.反應結束后,擴增管請置于密封袋內丟棄,當日清理,切忌開蓋。

        5.不同批號試劑請勿混合使用,請在有效期內使用試劑盒。

        6. 本品僅用于體外診斷。


        企業愿景

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